Gru har forladt sin skurkelivsstil til fordel for sine tre adoptivdøtre Margo, Agnes og Edith og lever nu et fredeligt liv som alenefar. Men Gru bliver kidnappet af agenten Lucy Wilde og ført til Anti-Skurke Forbundet, den verdensomspændende organisation, der har til formål at bekæmpe kriminalitet og anden skurkagtig aktivitet.